glycinate ion이 sample buffer와 stacking gel 속에 도달하면 pH가 낮아져(pH 6.8) 평형이 zwitterion을 형성하는 방향으로 이동된다. sample과 stacking gel을 통한 mobile ion이 결핍됨으로써 current flow가 감소하게 된다. 따라서 일정한 전류를 유지하기 위하여 chloride ion과 glycine ion 사이에 high localized voltage gradient가 형성되어 SD
2. Method
[실험재료]
premix, template & primer, D.W, mineral oil, thermocycler(PCR기계), Seakem LE agarose, gel caster, 1×TAE, EtBr, 마이크로피펫, 1.5㎖ tube
[실험방법]
① premix가 들어있는 20㎕ tube에 template DNA 1㎕, primer 2㎕를 D.W 17㎕를 넣고 잘 섞기 위해 vortexing 해준다.
② 적당하게 centrifuge 해준다.
- vortexing 시에 위로
전기영동(agarose gel electrophoresis)에 의한 유전자의 분리
a. Agarose gel 전기영동 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들로는 DNA의 분자의 크기, Agarose의 농도, DNA 형태에 따라 이동속도가 다르다. 또 전압이 높을수록 전기장의 방향, Ethidium bromide, 전기영동 buffer의 성분과 이온의 강도도 전기영동 속도에 영향을
DNA를 loading하게 되면 크기와 무게, 모양에 따라서 많이 이동할 수도, 적게 이동할 수 있다. 이 차이를 가지고 어느 band가 어떤 물질을 가지고 있는지를 확인할 수 있다.
① Agarose gel 전기영동 시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들
a. DNA분자의 크기가 클수록 느리게 이동한다.
b. Agarose의 농도가 높을수록
일반생물학및실험 Report 2020 November 01
생물학실험 Report
의생명공학과
Ⅰ. 기본정보
실험 제목: DNA Gel electrophoresis
실험 목적: 플라스미드 DNA와 PCR 생산물을 전기영동을 통해 확인하는 실험실험자: antler11
Ⅱ. 서론 (Introduction)
1. PCR (polymerase chain reaction)
PCR(polymerase chain reaction)은 1983년, K.B.Mullis가 고
DNA를 제한효소로 처리하고, 전기영동법과 PCR을 이용하여
DNA를 분리하고 확인하는 기술을 습득한다. 제한효소의 종류에 따른 절단 방식을
알아본다.
2. 실험 원리
1) 제한 효소 (Restriction enzyme)
(1) 제한 효소의 정의
* 제한 효소는 DNA분자의 특정 염기 배열을 인식하여 자르는 일종의
DNA 중합 효소가 주형 DNA에서 새로운 DNA를 만들게 된다. PCR은 DNA, RNA 그리고 단백질 수준의 PCR로 나뉠 수 있다. 보통 유전자를 얻는 실험을 할 경우, 그 유전자의 전체를 보려는 것이 아닌 유전자 안에서의 특정 유전자를 관찰하는 것이 목적이다. 하지만 DNA를 바로 PCR하게 되면 특정 유전자를 얻기 힘들고
DNA를 제한효소로 처리하고, 전기영동법과 PCR을 이용하여
DNA를 분리하고 확인하는 기술을 습득한다. 제한효소의 종류에 따른 절단 방식을
알아본다.
2. 실험 원리
1) 제한 효소 (Restriction enzyme)
(1) 제한 효소의 정의
* 제한 효소는 DNA분자의 특정 염기 배열을 인식하여 자르는 일종의
DNA손상을 감지하는데 alkali 의 경우가 더욱 민감한 방법이라는 보고가 있으나 실험 목적에 따라 적절한 방법을 선택하여야 한다.
1.1.3. 실험과정은 data 분석까지 하루에 끝낼 수 있어 간단하며, 손상을 단일세포수준에서 정량이 가능하므로 적은 sample의 양으로도 실험이 가능하며 형광염색에 의해 눈으
1. Object
제한효소 활용 및 Ligation, 전기영동, plasmid prep. 등의 여러 실험을 통해 Gene cloning의 전반적인 실험 및 이해를 하고, PCR의 기초적인 간단한 실험을 함으로써 DNA와 유전자를 다루는 molecular biology에서의 이론적 측면뿐만 아니라 실험적인 측면 또한 함양한다.
2. Date
실험기간: 2011년 11월 7일 –